date:2023-11-23 09:09:42
趨化性被描述為細胞向趨化劑的定向遷移。這個過程與趨化作用不同，趨化作用是無向的細胞遷移。當細胞經(jīng)歷趨化作用時，它們會因某種物質(zhì)而改變其遷移特性（例如，遷移速度的增加或降低），但不會優(yōu)選地沿該物質(zhì)的方向遷移。
趨化性是由特定物質(zhì)（趨化劑）誘導(dǎo)的。該物質(zhì)可以是趨化因子、趨化因子受體、生長因子或生長因子受體。重要且已充分描述的化學(xué)引誘劑是例如趨化因子受體CXCR4及其配體CXCL12、EGFR和EGF，以及CCR7和CCL21。
趨化網(wǎng)絡(luò)在健康和疾病中發(fā)揮著重要作用。一方面，趨化性在許多生理過程中至關(guān)重要，例如在炎癥細胞的招募或器官發(fā)育過程中。另一方面，趨化過程可以促進癌癥進展，例如在轉(zhuǎn)移過程中，趨化性的惡意重編程導(dǎo)致細胞侵襲和擴散。
開始實驗前需要確認的問題
為了正確設(shè)置趨化性測定，首先確認以下至關(guān)重要的問題：
您打算研究哪種細胞類型？
了解您感興趣的細胞類型--包括培養(yǎng)基要求和遷移速度--對于后續(xù)的檢測計劃至關(guān)重要。
所分析的細胞類型的遷移速度是多少？
雖然有些細胞遷移速度較慢(如腫瘤細胞或成纖維細胞)，但其他類型的細胞(如白細胞)遷移速度非常快。細胞遷移速度將決定實驗的持續(xù)時間和圖像之間所需的間隔。此外，梯度穩(wěn)定性必須足夠高，以適應(yīng)實驗的總持續(xù)時間。ibidi µ -Slide Chemotaxis適用于慢速和快速遷移細胞的趨化性分析。
ibidi µ -Slide Chemotaxis 2D and 3D細胞趨化載玻片
最佳培養(yǎng)基是什么？
大多數(shù)細胞類型在含有胎牛血清(FCS)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。FCS含有許多可以影響細胞遷移的因素（例如酶、激素和生長因子），因此可能會改變趨化性測定的結(jié)果。例如，趨化劑對細胞遷移的影響可以被FCS誘導(dǎo)的影響所掩蓋。在開始測定之前逐漸降低培養(yǎng)基中的FCS濃度是克服這個問題的一種方法。此外，還開發(fā)了不含F(xiàn)CS的特殊無血清培養(yǎng)基。在開始測定之前，必須測試每種感興趣細胞類型的最佳培養(yǎng)基成分。
感興趣的細胞類型的最佳接種密度是多少？
接種密度取決于許多細胞因素，例如增殖速率、行為、形狀、上皮或間充質(zhì)狀態(tài)以及對細胞與細胞接觸的依賴性。此外，在確定最佳細胞接種密度時必須考慮實驗持續(xù)時間。為了有足夠的可追蹤細胞，開始實驗時密度不能太低。在實驗結(jié)束時，單細胞應(yīng)該是清晰可定義和可追蹤的。考慮到這些因素，在開始趨化性測定之前，應(yīng)分別確定每種細胞類型的最佳接種密度。
應(yīng)該進行多少次實驗？
通常，三到五次重復(fù)實驗足以從趨化組和相應(yīng)的對照組創(chuàng)建重要數(shù)據(jù)。每個實驗應(yīng)包含20-40個單細胞的跟蹤數(shù)據(jù)，這可以使用低放大倍率顯微鏡物鏡（例如5倍或10倍）來實現(xiàn)。
我應(yīng)該進行2D或3D趨化性分析嗎？
大多數(shù)細胞自然嵌入3D矩陣中。在趨化性測定過程中在2D環(huán)境中培養(yǎng)它們可能會改變它們的行為和遷移能力。為了克服這個問題，可以將細胞嵌入模仿其自然環(huán)境的3D基質(zhì)中，例如膠原蛋白、基質(zhì)膠或其他水凝膠。ibidi µ -Slide Chemotaxis非常適合2D和3D實驗。
3D趨化性測定的優(yōu)點：
大多數(shù)細胞類型更類似于體內(nèi)的環(huán)境-高度明確的環(huán)境（例如纖維或基質(zhì)）
可以使用懸浮細胞進行趨化性測定
3D趨化性測定的局限性:
凝膠處理困難；實驗過程中需要控制更多參數(shù)
細胞可能附著在2D表面，從而創(chuàng)造2.5D條件
細胞可能在3D跟蹤過程中失焦
有關(guān)2D和3D趨化性測定的更多信息，請參閱以下實驗應(yīng)用說明：
* 3D Chemotaxis Protocol for Non-Adherent Cells in a Gel Matrix
* Immunofluorescence Staining of HUVEC in 3D in the μ-Slide Chemotaxis
實驗中必須包括哪些對照？
為了正確分析趨化性實驗，至關(guān)重要的是包括不含任何趨化劑的陰性對照 (-/-)，以及整個室中含有趨化劑的陽性對照 (+/+)。
使用 ibidi µ-Slide Chemotaxis 時，由于梯度以外的所有條件都是對稱的，因此需要最少的控制測量。這允許相互獨立地分析趨化性和趨化運動。在該實例中，趨化劑誘導(dǎo)癌細胞的趨化性和趨化運動。
包括實驗組(+/-)、陽性(+/+)和陰性(-/-)對照組的趨化分析的實驗設(shè)置(上圖)和數(shù)據(jù)圖(下圖)。
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